date:2023-05-24 15:16:47
想改善您的顯微鏡圖像嗎？
您對(duì)自己的圖像總是這樣感到不滿嗎？
別擔(dān)心，在這里ibidi雷萌迷你視頻系列將幫助您獲得精美的圖像！
……在這部小視頻中，我們將向您展示彎液面的形成是如何干擾相位對(duì)比顯微鏡成像的。
……如何能獲得清晰且對(duì)比度良好的圖像？
相差成像
到目前為止，相襯是生物光學(xué)顯微鏡中最常用的方法。它是細(xì)胞培養(yǎng)和活細(xì)胞成像中成熟的顯微技術(shù)。當(dāng)使用這種廉價(jià)的技術(shù)時(shí)，無(wú)需預(yù)先固定或標(biāo)記，就可以在自然狀態(tài)下觀察活細(xì)胞。
未染色的活細(xì)胞幾乎不吸收光。光吸收不良導(dǎo)致圖像中強(qiáng)度分布的差異極小。這使得細(xì)胞在明場(chǎng)顯微鏡下幾乎不可見(jiàn)或根本不可見(jiàn)。當(dāng)光穿過(guò)細(xì)胞時(shí)，會(huì)發(fā)生小的相移，這是人眼看不到的。在相差顯微鏡中，這些相移被轉(zhuǎn)換成振幅的變化，可以觀察到圖像對(duì)比度的差異。然而，這種無(wú)標(biāo)記技術(shù)在很大程度上取決于光路中組件的正確對(duì)齊。這種對(duì)準(zhǔn)可能會(huì)受到自然發(fā)生的彎液面效應(yīng)的干擾，從而導(dǎo)致相襯變?nèi)酢?/p>
相差顯微鏡要考慮的一個(gè)重要問(wèn)題是彎液面，它是在氣液界面自然形成的。這種現(xiàn)象會(huì)顯著降低圖像質(zhì)量，尤其是在像標(biāo)準(zhǔn)96孔板這樣的小型培養(yǎng)孔中。由于彎液面而產(chǎn)生的衍射擾亂了光路內(nèi)相位環(huán)和相位板的正確對(duì)準(zhǔn)。
左邊具有彎液面的光束路徑未對(duì)準(zhǔn)，右邊是無(wú)彎液面的光路對(duì)準(zhǔn)正確，相位對(duì)比良好。
如何避免彎液面？
ibidi開(kāi)發(fā)出了多種解決方案完美地解決了這個(gè)問(wèn)題——并保證出色的相位對(duì)比圖像：
* ibidi μ-Slide 15孔3D載玻片和μ-Plate 96孔3D載玻片
* ibidi channel μ-Slides通道載玻片
* ibidi μ-Slides PH+
* ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區(qū)塊 高壁培養(yǎng)皿
μ-Slide 15孔3D載玻片 (formerly μ-Slide Angiogenesis)和μ-Plate 96孔3D載玻片 (formerly μ-Plate Angiogenesis 96 Well)
ibidi μ -Slide 15 Well 3D 和μ-Plate 96 Well 3D （下圖右）提供理想的細(xì)胞培養(yǎng)容器：
1）可獲得出色的相差圖像；
2）一種獨(dú)特的幾何技巧，即“孔中孔”技術(shù)，抑制了彎液面的形成，并在整個(gè)觀察區(qū)域產(chǎn)生了良好的相位對(duì)比。
而普通的細(xì)胞培養(yǎng)容器（下圖左）：
1）氣液界面彎液面：大部分觀察區(qū)域相差較差。
2）凝膠表面的彎液面：不可能同時(shí)聚焦所有細(xì)胞。
ibidi channel μ-Slides通道載玻片
ibidi channel μ-Slides通道載玻片為相差顯微鏡提供了理想的光學(xué)條件。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，通道自下而上充滿培養(yǎng)基。這在幾何上抑制了彎液面的形成，并在整個(gè)通道中實(shí)現(xiàn)了出色的相差。
ibidi μ-Slides PH+
ibidi μ-Slides PH+（有2 Well Ph+、4 Well Ph+兩種規(guī)格）專為相差顯微鏡設(shè)計(jì)。每個(gè)孔中的特殊中間擋板可避免彎液面形成并保證出色的相差——無(wú)論孔的那個(gè)部分都能完美成像。
使用μ-Slide 2 Well Ph+、4 Well Ph+可減少?gòu)澮好妫黾訉?duì)比度良好的細(xì)胞面積。這種良好的對(duì)比是由于中間擋板產(chǎn)生的平行光束路徑。
Ph+孔與標(biāo)準(zhǔn)孔的比較：Ph+孔無(wú)彎液面效應(yīng)
ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區(qū)塊 高壁培養(yǎng)皿
中心擋板提供卓越的相位對(duì)比度
ibidi μ-Dish 35mm Quad四區(qū)塊高壁培養(yǎng)皿（左圖）居中的中間擋板減少了彎液面的形成，從而實(shí)現(xiàn)了出色的相位對(duì)比光學(xué)。同時(shí)，這種Ph+特征有利于細(xì)胞的均勻分布。
就像ibidi μ-Slide 2 Well Ph+和μ-Slider 4 Well Ph+一樣，μ-Dish 35mm Quad四區(qū)塊高壁培養(yǎng)皿將出色的細(xì)胞生長(zhǎng)和出色的高分辨率顯微鏡結(jié)合在一起，無(wú)論是使用相差顯微鏡還是熒光顯微鏡。
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